Sisu
- Eelis: tundlikkus
- Eelis: eripära
- Puuduseks: altid valedele või subjektiivsetele tulemustele
- Puuduseks: suured kulud ja tehniline nõudlus
Antud proovis konkreetse valgu täpsustamiseks kasutatav analüütiline meetod Western blot kasutab ensüümi või fluorestsentsmärgisega primaarse antikeha võimet seonduda selle spetsiifilise antigeeniga. See on kolmeastmeline protsess, mis algab geelelektroforeesiga, millele järgneb membraani blotimine ja antikehadega sondeerimine. Valgu tuvastamine võib olla otsene või kaudne, kusjuures viimane kasutab primaarse vastu suunatud märgistatud sekundaarset antikeha. Ehkki Western blot on aktsepteeritud rutiinse valguanalüüsi tehnikana, on sellel nii piiranguid kui ka eeliseid.
Eelis: tundlikkus
Üks suurimaid Western blot'i pooldavaid argumente on selle tundlikkus. Kuna tehnikast on võime proovis tuvastada vaid 0,1 nanogrammi valku, võib see teoreetiliselt olla tõhus varajase diagnostika vahend, mis tuvastab patsiendiproovis isegi vähimatki immunogeenset vastust viiruse või bakterite poolt. Kaudne läänepunkt põhineb sellel tundlikkusel sekundaarse antikeha võimest võimendada pildisüsteemi tuvastatud signaali intensiivsust. Suurem tundlikkus tähendab, et testimiseks on vaja vähem antikehi, mis vähendab märkimisväärselt laborikulusid.
Eelis: eripära
Western blot -tehnoloogia võlgneb selle eripära kahest suurest tegurist. Kõigepealt sorteerib geelelektroforees proovi erineva suuruse, laenguga ja kehaehitusega valkudeks. See protsess on iseenesest tohutu samm avastamise suunas, kuna geelis moodustatud ribad annavad juba vihjeid huvipakkuva valgu või polüpeptiidi suuruse kohta. Antikeha ja antigeeni interaktsiooni spetsiifilisus on teine suur tegur. Kuna spetsiifilised antikehad näitavad afiinsust spetsiifiliste valkude suhtes, saab protsessi abil selektiivselt tuvastada sihtvalku isegi 300 000 erineva valgu segus.
Puuduseks: altid valedele või subjektiivsetele tulemustele
Vaatamata tundlikkusele ja spetsiifilisusele võib Western blot ikkagi anda ekslikke tulemusi. Valepositiivsed tulemused, kui antikehad reageerivad sihtotstarbelise valguga, juhtub sageli siis, kui HIV-testiga patsiendil on tuberkuloos või mitmed parasiitide nakkused. Seevastu valenegatiivne tulemus võib kergesti tekkida, kui suurematele valkudele ei anta piisavalt aega membraani kandmiseks. Vale blotimine ja töötlemine tekitavad sageli viltu, pleekinud või isegi mitu riba, mis muudab testi tulemused tehniku tõlgenduse alla.
Puuduseks: suured kulud ja tehniline nõudlus
Western blot'i maksumus koosneb märgistatud antikehade, kvalifitseeritud analüütikute ja laboriseadmete suurtest individuaalsetest kulutustest. Õrn protsess, lääne blotimine nõuab proovi koostisosade õigeks tuvastamiseks igas etapis täpsust. Väike viga reagendi kontsentratsioonis või inkubatsiooniperioodis võib olla kogu protsessi jaoks hukatuslik. Lõpuks võivad tuvastamiseks ja kuvamiseks vajalikud seadmed - kemoluminestsents-, fluorestsents-, radioaktiivsed või lasertuvastussüsteemid - olla keskmise mikrobioloogiaüksuse jaoks liiga kallid.