Sisu
Geelelektroforees on laborites kasutatav meetod DNA ahelate mõõtmiseks ja sortimiseks. See on vajalik, kuna DNA on normaaltingimustes manipuleerimiseks liiga väike, isegi kui seda vaadata enamiku mikroskoopide abil. Geelelektroforeesi laboris kasutatakse suhteliselt lihtsat protseduuri ja sama põhitehnikat saab kasutada ka üksikute valkude eraldamiseks.
Geeli maatriks
Geelelektroforeesiprotseduuri alustamiseks peate esmalt looma geeli. Tavaliselt valmistatakse geelid õhukeste lehtedena, kasutades ainet, mida nimetatakse agaroosiks. Pulbriline agaroos pannakse kolbi, millele järgneb soolavee lahus, mida nimetatakse puhverlahuseks. Seda agaroosi ja puhvri segu kuumutatakse, kuni kaks ainet sulavad kokku, seejärel valatakse vormimisvormi. Enne geeli jahtumist asetatakse vormi ühes otsas seade, mida nimetatakse kammiks. Kui geel on jahtunud, eemaldatakse kamm, jättes vähe pilusid, mida kasutatakse DNA proovide hoidmiseks.
Jahutatud agaroosisegu (mida nimetatakse geelmaatriksiks) eripära tuleneb asjaolust, et see luuakse soolase veega. Elektrifitseerimisel muutub maatriks juhtivuseks, võimaldades elektril voolata kogu selle pikkuses. Geelimaatriksi veel üks eriline omadus on korrapäraste mikroskoopiliste aukude olemasolu. Need augud võimaldavad DNA ahelatel liikuda läbi geeli maatriksi ja hõlbustavad sortimisprotsessi.
Elektroforeesi koda
Järgmine samm on elektroforeesi kambri loomine. See on väike ristkülikukujuline kast, juhtmega, mille mõlemas otsas on positiivne ja negatiivne elektriühendus. Kambrid on tavaliselt madalad, piisavalt väikesed, et mahutada lauale, ja ehitatud läbipaistvatest materjalidest, näiteks pleksiklaasist.
Soolavee lahus valatakse elektroforeesi kambri põhja ja geeli maatriks sukeldatakse selle lahuse sisse pisut. Soolaveel on kaks eesmärki: aidata kaasa elektrivoolule ja hoida geeli maatriks niiskena. Kuna DNA-d liigutab negatiivne laeng, asetage maatriks nii, et proovid asuvad negatiivse elektriühenduse kõrval.
DNA ettevalmistamine
Seejärel valmistatakse DNA proovid. Kuna lahuses olevat DNA-d on kõike muud kui võimatu näha, lisatakse igale üksikule proovile värvaine, mida nimetatakse laadimispuhvriks. See aine paksendab ka DNA lahust, muutes selle vähem nohusemaks ja töödeldavamaks. Kanna pipeti abil DNA lahuse proov geeli maatriksi igasse vahelduvasse pilusse. Iga proovi vahel olevasse tühja pessa pange katse kontrollimiseks ja võrdlemiseks DNA lahus, mille pikkust te juba teate (nimetatakse DNA standardiks).
Lülitage toide sisse
Lülitage nüüd oma elektroforeesi kamber sisse. Negatiivse jõu korral sunnitakse teie DNA proovid kogu kambri ulatuses. Väikesed DNA ahelad liiguvad kiiremini läbi geeli maatriksi ja lühikese aja jooksul eralduvad nad pikematest, aeglastest ahelatest. Värvaine värvaine võimaldab teil jälgida DNA jälge. Te ei näe üksikuid DNA ahelaid, kuid sama pikkusega ahelad klammerduvad kokku.
Viimased sammud
Kui DNA on välja sorteeritud, eemaldatakse maatriks elektroforeesi kambrist. Seejärel värvitakse DNA, et hõlbustada mõõtmist ja uurimist.