Sisu
- Järjestikused lahjendused
- Plaatide ettevalmistamine tiitri arvutamiseks
- Viiruse tiitri loendamine ja arvutamine
- Hoiatused
Viiruse tiitri arvutamine on keeruline viis öelda, et teadlane loeb viiruste arvu konkreetses proovis. Viirusetiitrite arvutamiseks nakatavad teadlased kasvavate bakterite plaate erineva kontsentratsiooniga viiruslahustega ja arvutavad viiruste arvu algses lahuses, lugedes kokku viirusnakkuse tõttu surnud bakterid.
Järjestikused lahjendused
Pange kindad, täitke 10 kultuuritoru 9 ml puljongiga ja sildistage need “10 ^ -1”, “10 ^ -2”, “10 ^ -3” ja nii edasi, kuni “10 ^ -10”. Need tuubid kasutatakse faagi tiitri arvutamiseks kasutatavate viiruslike seerialahjenduste korral. Kuna viirused võivad kasvada uskumatult kõrgete kontsentratsioonideni, peate neid efektiivseks loendamiseks lahjendama. Iga tuub esindab viiruse kümnekordset lahjendust.
Võtke 1 ml viiruse kultuuri, mille jaoks soovite faagi tiitrit arvutada, ja viige see pipeti abil katseklaasi pealkirjaga “10 ^ -1”. Segage toru hästi. See on teie esimene kümnekordne lahjendus.
Võtke katseklaasist sildiga “10 ^ -1” 1 ml segakultuuri ja viige see uue pipetiga järgmisse katseklaasi, sildiga “10 ^ -2.”. Segage ka see katseklaas.
Jätkake seda mustrit jadalahjenduste seeria loomiseks. Lõpuks on teil 9 tuubi 9 ml ja 1 toru 10 ml. Teie tuubides olevad viirusekoormused lahjendatakse kuskil 10-kordselt (teie esimene tuub) või 100-kordselt (teie teine tuub) kuni kümme miljardit korda (teie viimane tuub).
Plaatide ettevalmistamine tiitri arvutamiseks
Võtke 10 katseklaasi trüptooni pehmet agarit ja 10 Petri plaati ning sildistage need vastavalt seeriaviisilistele lahjendustorudele.
Vabastage korgid nii, et need ei kuumeneks, ja asetage agar torud keeva veega keedunõusse. See sulatab agari nii, et saate selle Petri plaatidele valada.
Viige oma torud kuumaveevanni, mille temperatuur on vähemalt 45 kraadi. See tagab, et teie agar ei tahene torudes enne, kui teil on võimalus see Petri tassi valada.
Lisage agarile kaks tilka bakterikultuuri ja segage see ettevaatlikult. Need on bakterid, mis tapetakse, võimaldades teil loendada viiruseosakeste arvu konkreetses lahuses.
Kui katsutid on endiselt kuumaveevannis, lisage 1 ml igast jadalahjendusest vastavasse agaritoru. Näiteks 1 ml teie 10 ^ -1 jadalahjendusest peaks minema agaritorusse, millel on silt “10 ^ -1”.
Segage kõik katseklaasid ja valage need seejärel vastava sildiga Petri plaadile. Nii moodustub õhuke kiht agarit, mis on nakatatud igasse plaati bakterite ja viirustega. Laske plaatidel inkubaatoris üleöö kasvada.
Viiruse tiitri loendamine ja arvutamine
Võtke plaadid inkubaatorist välja ja uurige neid. Te peaksite nägema häguseid alasid kogu plaadil, kus bakterid on kasvanud, välja arvatud väikesed selged laigud, mida nimetatakse naastudeks. Need naastud on surnud bakterite plaastrid ja iga naast esindab ühte viirust.
Leidke plaat, millel on 30 kuni 300 naastet, ja lugege sellel plaadil täpne naastude arv.
Võtke oma plaadil olevate naastude arv ja korrutage 10-ga. Kui loendaksite 157 naastu, saaksite 1570.
Korrutage eelmises etapis saadud arv korrutisega lahjendustorul oleva arvu pöördvõrdelise väärtusega. Näiteks kui teie valitud plaat oli 10–5 plaati, siis korrutate 1570 10 ^ 5-ga, et saada 157000000. Viimane arv on teie faagi tiiter ja tähistab viiruste arvu milliliitris teie algkultuurist.