Sisu
Kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) on laboratoorne tehnika, mida kasutatakse ühendite eraldamiseks ja identifitseerimiseks. See on kolonnkromatograafia tüüp, mis põhineb lahusel ühendite erineval polaarsusel, et neid lahutada. HPLC erineb tavalisest kolonnkromatograafiast seetõttu, et lahuse kiiremaks läbi kolonni jõudmiseks rakendatakse rõhku, ning seetõttu saadakse kiiremad ja mõnikord ka täpsemad tulemused. Eesmärk on ühendid kolonnis eraldada ja lasta neil eraldi väljuda.
Coelution
HPLC kiiruse ja ühendite erinevast polaarsusest sõltuvuse tõttu võivad kromatograafiaaparaadist väljuda kaks või enam sarnase struktuuri ja polaarsusega ühendit samal või peaaegu samal ajal. Seda nimetatakse coelutioniks. Koelutsioon muudab keeruliseks täpselt määrata, milline segu segu elueerus.
Adsorbeeritud ühendid
HPLC kasutab tavaliselt klaasist kolonni, mis on täidetud erinevatest materjalidest helmestega. Kolonni kaudu sunnitud segudes on kemikaale, mis seovad helmeid erineva tugevusega. Sidumise tugevus, mis sõltub polaarsuse sarnasusest, määrab, kui kaua kemikaal enne vabanemist helmestega seostub. Mõned ühendid seonduvad nii tugevalt, et need ei vabane kunagi kolonni helmestest ega mõõdeta seda kunagi kolonni väljuvas lahuses.
Maksumus
Tüüpilised laboratoorsed eraldamismeetodid hõlmavad testi või eraldamismeetodi väljatöötamist ja selle analüüsi rakendamist, et eraldada lahused üksikühenditest. Selle tulemuseks on tavaliselt mitu lahendust, mis peavad samuti läbima protseduurid, põhjustades keerukuse eksponentsiaalse suurenemise. Kuigi HPLC võib seda protsessi sageli lihtsustada ja kiirendada, võivad HPLC-seadme väljatöötamise kulud muutuda tohutuks. HPLC-seadme väljatöötamine, ehkki palju tõhusam, on palju kulukam kui ühendite eraldamiseks teiste testide väljatöötamine. See muudab selle paljude väikeste eraomanduses olevate laboratooriumide jaoks rahaliselt elujõuliseks.
Keerukus
HPLC-d ei kasutata mitte ainult lihtsate ühendite eraldamiseks, vaid seda kasutatakse ka spetsiifiliste valkude eraldamiseks rakusegust. Sel juhul kaetakse kolonni helmed tavaliselt selle valgu spetsiifilise antikehaga, mida peate koguma. Valgud seovad antikehi ja järelejäänud lahus juhitakse läbi kolonni, seejärel vabastatakse valgud teise lahuse abil ja kogutakse. Selleks on vaja, et kõrgelt kvalifitseeritud tehnik jälgiks kolonni kogu aeg ja veenduks, et protsess kulgeks täpselt plaanipäraselt.