Polnud nii ammu, et geenitehnoloogia oli ulme - pani ühe organismi kasvama teise omadustega. Alates 1970. aastatest on geneetilised manipuleerimise tehnikad siiski jõudnud kaugele, kus võõra DNA splaissimine organismi on peaaegu rutiinne. Näiteks võib kahjurite resistentsuse geenid liimida maisiks, iniminsuliini valmistamise geene saab panna bakteritesse ja inimese vähki jäljendavaid geene laborihiirtesse. Menetluse üksikasjad on lühikese artikli kirjeldamiseks liiga keerulised, igal sammul on palju võimalusi, kuid sammude loogilise jada kontseptuaalne ülevaade on üsna sirgjooneline.
Inkubeerige huvipakkuvat plasmiidset DNA-d restriktsiooniensüümiga. Restriktsiooniensüüm tuvastab DNA aluste spetsiifilise järjestuse ja lõikab DNA sellel hetkel lahku. Restriktsiooniensüümid saadakse bakterite viirusevastasest kaitsemehhanismist. Need on molekulid, mis nuhkivad DNA, kui nad tuvastavad aluste teatud mustri.
Inkubeerige lõigatud plasmiid ja genoomsed DNA fragmendid DNA ligaasiga. Enamiku restriktsiooniensüümide korral on ümmargusel plasmiidil ja genoomsel DNA fragmendil komplementaarsed "kleepuvad otsad", mis haaravad üksteise külge. Seejärel lõpetab DNA ligaas tükkide kokku liimimise. Tulemuseks on hunnik ümmargusi plasmiide, mis sisaldavad osa genoomsest DNA-st.
Sisestage plasmiidid bakteritesse ja kultiveerige baktereid modifitseeritud DNA-ga immutatud organismide kolooniate kasvatamiseks. Kui teie plasmiidil on antibiootikumiresistentsed geenid, mis peremeesbakteritel puuduvad, saate edukalt modifitseeritud baktereid automaatselt skriinida, kultiveerides baktereid antibiootikumidega infundeeritud kasvukeskkonnas. Plasmiidide bakteritesse sisestamiseks on mitmeid meetodeid, näiteks mikronõela kasutamine, bakteriväljas oleva membraani väikeste aukude avamiseks elektrivälja rakendamine või bakterite ja plasmiidide kokku panemine samasse lahusesse ja laskmine bakteritel neid absorbeerida loomulikult.
Proovrakud modifitseeritud bakterite erinevatest kolooniatest. Proovivõetud rakke pestakse bakterimembraanide lagundamiseks ja DNA ekstraheerimiseks pesuvahendi lahusega, seejärel kuumutatakse seda või eraldatakse ahelad eraldamiseks naatriumhüdroksiidiga. See paneb DNA analüüsima alusjärjestuse.
Inkubeerige DNA fluorestsentssondiga. Shine inkubeeritud DNA-le ultraviolettvalgust ja jälgige fluorestsentsi. Sond koosneb lühikesest DNA järjestusest, mis sobib teie sisestatud genoomse DNA-ga. Kui sond sobib otsitava DNA-ga, hakkab see valgustatuna helendama.
Isoleerige bakterid kolooniatest, mis sisaldavad geeni, mida soovite sisestada. Kopeerige oma DNA, lastes bakterikolooniatel kasvada, või ekstraheerige DNA nagu varem ja kopeerige see polümeraasi ahelreaktsiooni masinas.