Sisu
Baktereid kasvatatakse Petri tassidel tahkel söötmel, mida tuntakse bakteriagarina, kus moodustuvad ümmargused kolooniad. Erinevalt üksikust bakterirakust on koloonia piisavalt suur bakterirühm, et palja silmaga näha. Bakterite kasvu saab mõõta kolooniate arvu lihtsa vaatlusega; kvantitatiivsemad meetodid hõlmavad siiski loendamiskambri kasutamist või sagedamini elujõuliste plaatide loendamist. Viimast kasutatakse kõige sagedamini, kuna see annab ka kvalitatiivset teavet, näiteks erinevate kasvutingimuste mõju kohta. Kuna Petri tassis võib olla miljardeid baktereid, nõuab esmalt mõõtmine proovi lahjendamist, et oleks võimalik arvutada kolooniate arv.
Lisage katseklaasis 10 mikroliitrit lähtebakterikultuuri 90 mikroliitri lahjenduskeskkonnale. Toru kaas keeratakse tihedalt kokku ja segatakse homogeense segu saamiseks vortexiga. Nüüd on proov kümnendik algsest kontsentratsioonist.
Viige 10 mikroliitrit sellest uuest proovist uude katseklaasi, mis sisaldab 90 mikroliitrit lahjenduskeskkonda, ja segage see uuesti. Veelkord lahjendatakse tulemuseks proov veelgi - nüüd on see sajandik algsest kontsentratsioonist. Korrake seda mitu korda, kuni esialgne proov on lahjendatud 10-ni4 ja 1010 korda. Veenduge, et iga tuub oleks õigesti lahjendatud, näiteks 10-1, 10-2 ja nii edasi.
10 mikroliitrit viimast lahjendust viidi agariplaadile. Jaotage bakterilahus jaotusplaadi abil kogu agariplaadi pinnale. Korda seda veel kahe plaadi jaoks. Samuti on tavaline, et neid samme viiakse võrdluseks läbi teiste lahjendustasanditega. Märgistage kindlasti plaatide põhjad. Pange iga plaadi kaaned tagasi ja laske agarplaatidel mitu minutit kuivada kas laboripingil leegi all või inkubaatoris. Plaadid asetatakse inkubaatorisse, mis tuleks seada bakteritüve jaoks sobivale temperatuurile. Lasta kasvada 12–16 tundi.
Kolooniad peaksid olema nähtavad 16 tunni pärast; mõned geneetilised modifikatsioonid võivad siiski vajada kauem aega (näiteks värvuse areng). Kui kolooniad on jälgitavad, võtke plaadid välja ja leidke need, millel on 30–300 kolooniat. Pideva markeri abil pange punkt Petri tassi põhjale - agariga küljele, mitte kaanele - kõikjale, kus agari kaudu on näha koloonia. Loendage iga markerpunkt. Korda iga roa puhul.
Bakterite koguse mõõtmiseks lähtekultuuris selle katse jaoks tuleb lahjendus arvutamisel kahes suunas pöörata. Esiteks, kui võtsite katseklaasist ühe mikroliitri Petri tassi panemiseks, võtsite ühe kümnendiku lahjendatud proovist, nii et selle ümberpööramiseks peate kõik korrutama 10-ga. Lisaks, kui katseklaasi lahjendustegur oli näiteks 10-7 , siis tuleb kolooniate arv korrutada 10-ga7 lahjendamise efekti muutmiseks. Eemaldage lihtsalt arvutustes eksponendist negatiivne märk. Kasutage valemit:
× 10 × = kolooniaid moodustavate ühikute arv (CFU) lähtekultuuri milliliitri kohta. See on teie Petri tasside bakterikasv.