Sisu
Gram-plekk on diferentsiaalvärvimisprotseduur, mis näitab nende plekivärvi põhjal, millised bakterid on gram-positiivsed või gramnegatiivsed. Atsetoonalkohol on üks reaktiiv, mida selles protsessis kasutatakse värvuse eristamiseks. Gram-positiivsetel bakteritel on paks peptidoglükaani kiht ja nad värvivad lilla värvi, samas kui gramnegatiivsetel mikroorganismidel on peptidoglükaani kiht vähene või puudub üldse ja nad on roosad.
Primaarne plekk-kristallviolet
Kui bakteriproovi objektiklaas on ette valmistatud, kasutatakse proovi värvimiseks esmalt kristallvioletti. Sel hetkel on nii grampositiivsed kui ka gramnegatiivsed bakterid lillad. Tavaliselt kantakse kristallvioletti slaidile 30 sekundiks, enne kui pesta üleliigne plekk veega maha. Kristallvioletne võib peptidoglükaani kihtidesse pisut kleepuda, nii et mitte kogu esmane plekk ei lähe veega maha.
Mordant-jood
Seejärel lisatakse ühe minuti jooksul proovile joodi. See toimib peitsina, mis aitab värvaineid fikseerida värvimisprotsessis. Jood täidab seda funktsiooni, seostudes kristallvioletiga ja luues lahustumatu kompleksi, mis haakub grampositiivsetes bakterirakudes leiduva paksu peptidoglükaani kihiga palju paremini kui ainult kristallviolett. Pärast joodi lisamist pole veega pesemisetappi.
Värvitooja-alkohol
Värvimisvahendina võib kasutada kas atsetooni või etüülalkoholi. Alkohol lahustab gramnegatiivsete bakterite rakumembraanis leiduvad lipiidid, võimaldades kristallviolet-joodi kompleksil õhemast peptidoglükaani kihist välja lekkida. Alkoholi lisatakse 10 kuni 20 sekundit; seda valatakse slaidil, kuni kogu jood on ära pesta ja äravool on värvitu. Gram-värvimisprotsessi praegusel hetkel on gramnegatiivsed bakterid värvitu, samas kui grampositiivsed bakterid säilitavad endiselt kristallvioleti. Kui valmis on, tuleb slaidi loputada veega, et peatada värvimuutus.
Külmakivi-safraniin
Seejärel lisatakse safraniini, et suurendada värvitu gramnegatiivsete bakterite nähtavust ja kontrasti. Plekk muudab need bakterid mikroskoobi all roosaks. Kuna plekki lisatakse tervele proovile, värvib see ka grampositiivseid baktereid, kuid kristallvioleti tumedam varjab heledama safraniini roosa värvi. Kui objektiklaasi proov on umbes minuti jooksul üle ujutatud safraniiniga, kasutatakse vett, et pesta üleliigne plekk, mis ei kleepunud bakterirakkudesse.