Keemikud kasutavad ühendite segude eraldamiseks kõrgsurvevedelikkromatograafiat ehk HPLC. Üldiselt seisneb meetod proovi süstimises kolonni, kus see segatakse ühe või mitme lahustiga. Erinevad ühendid adsorbeerivad või kleepuvad kolonni erineval määral; ja kuna lahusti surub ühendeid läbi kolonni, väljub segu üks komponent esimesena kolonnist. Seade tuvastab ühendid kolonnist väljudes ja tekitab kromatogrammi, mis koosneb graafikust, mille peetumisaeg on x-teljel ja signaali intensiivsus detektoril y-teljel. Kui ühendid kolonnist väljuvad, tekitavad nad kromatogrammis “piigid”. Üldiselt, mida kaugemal üksteisest ja mida kitsamad on kromatogrammi piigid, seda suurem on eraldusvõime. Teadlased leiavad, et eraldusvõime 1,0 või suurem on piisav eraldus.
Mõõdetakse kromatogrammil kahe külgneva piigi laiused, märkides, kus x-telje väärtused asuvad iga piigi aluses. X-telg tähistab peetumisaega, mida tavaliselt mõõdetakse sekundites. Seega, kui tipp algab 15,1 sekundist ja lõpeb 18,5 sekundist, on selle laius (18,5 - 15,1) = 3,4 sekundit.
Peetumisajad määrake, märkides ära aja, st asukoha x-teljel, mis vastab piikide maksimumide asukohtadele. See väärtus jääb tavaliselt laiuses arvutamiseks kasutatud kahe väärtuse vahele umbes poolel teel. Näiteks etapis 1 toodud näite maksimaalne väärtus on umbes 16,8 sekundit.
Arvutage kahe piigi vahel eraldusvõime R väärtusega
R = (RT1 - RT2) /,
kus RT1 ja RT2 tähistavad piikide 1 ja 2 peetumisaegu ning W1 ja W2 tähistavad nende aluste piikide laiusi. Jätkates näites sammudest 2 ja 3, on ühe piigi peetumisaeg 16,8 sekundit ja laius 3,4 sekundit. Kui teise piigi peetumisaeg oli 21,4 sekundit laiusega 3,6 sekundit, siis oleks eraldusvõime selline
R = (21,4 - 16,8) / = 4,6 / 3,5 = 1,3.