Sisu
Kvantifitseerige RNA proov, mõõtes selle ultraviolettvalguse (UV) neeldumist. Nano-tilk-spektrofotomeeter kasutab teie proovist ainult ühte või kahte mikroliitrit. Muud spektrofotomeetrid vajavad palju suuremat proovi. Nukleotiidide ekstinktsioonitegur ultraviolettkiirguse lainepikkusel 260 nm 1-cm valguse korral on 20. Selle ekstinktsioonikordaja põhjal on RNA neelduvus 40 ug / ml samades tingimustes üks. Seda teavet kasutades saate arvutada oma RNA proovi kontsentratsiooni.
Vajaduse korral lahjendage proov. Mikroküveti standardne lahjendus on 1:40. Lahjendage see, lisades 2 ui RNA proovi 78 ui steriilsesse vette.
Masina kalibreerimiseks pimekatse abil järgige konkreetse spektrofotomeetri protokolle ja määrake seejärel proovi optiline tihedus UV-lainepikkusel 260 nm.
Korrutage proovi neeldumine lahjendusteguriga 40 μg RNA / ml. Võrrand oleks järgmine: “RNA kontsentratsioon (µg / ml) = (OD260) x (lahjendustegur) x (40 µg RNA / ml) / (1 OD260 ühik)” (Hofstra.edu) Näiteks: kui lahjendasite oma proovi 1:40 ja teie neeldumise näit oli 0,08, korrutate 0,08 x 40 x 40 = 128 µg / ml = 0,13 µg / μL
Joonistage oma proovi puhtus, võttes veel ühe neeldumise näidu UV-lainepikkusel 280 nm. Suhe OD 260 / OD 280 näitab, kas ja millisel tasemel on teie proov valgu või fenooliga saastunud. Tulemus 1,8 kuni 2,0 näitab kvaliteetset RNA-d.