Sisu
Bakterite eraldamine pinnasest on oluline esimene samm paljudes mikrobioloogiakatsetes. Kui bakterid on eraldatud, saab neid täiendavalt analüüsida, et teha kindlaks sellised asjad nagu nende liigid ja funktsioon mullas. Isegi pisike kogus mulda võib sisaldada miljoneid baktereid, mistõttu on enne bakterite eraldamist proovist vaja mullaproovi lahjendada.
Mõõda 100 ml. destilleeritud vesi mõõtesilindris ja lisage see steriilsesse pudelisse.
Kaaluge 1 g mullaproovi ja lisage see destilleeritud vee pudelisse.Pange pudel tihedalt kinni ja loksutage seda lahuse põhjalikuks segamiseks.
Märgistage steriilsed katseklaasid "10 ^ -3", "10 ^ -4", "10 ^ -5" ja "10 ^ -6". Lisage igasse katseklaasi pipeti abil 9 ml destilleeritud vett.
Uue pipeti abil kantakse 1 ml pudelis olevat lahust katsutisse, mille silt on "10 ^ -3". Toru kork suletakse ja keerutage seda ettevaatlikult, kuni lahus on hästi segunenud.
Viige 1 ml lahust katseklaasis "10 ^ -3" uue pipetiga katseklaasi "10 ^ -4". Pange kork "10 ^ -4" kinni ja loksutage segu segamiseks. Korrake seda meetodit, et viia lahus torust "10 ^ -4" katseklaasi "10 ^ -5" ja seejärel torust "10 ^ -5" torusse "10 ^ -6".
Pange kolm proovi torudest "10 ^ -4", "10 ^ -5" ja "10 ^ -6". Uue pipeti abil viige 1 ml lahust tuubist Petri plaadile. Lisage plaadile umbes 15 ml toitainete agarit; seejärel pange taldrikule kaas ja keerutage õrnalt nii, et agar kataks plaadi põhja.
Tehke kontrollplaat, pannes uue pipeti abil Petri plaadile 1 ml destilleeritud vett. Lisage agar; pange kaas peale ja pöörake plaati.
Jätke Petri plaadid püstiasendisse, kuni agar on seadnud. Seejärel pöörake plaadid ümber ja inkubeerige neid kas inkubaatoris või toatemperatuuril nii vähe kui 24 tundi ja kuni viis päeva.
Pärast soovitud inkubatsiooniaega eemaldage plaadid inkubaatorist. Loendage bakterikolooniad plaatidele, mis sisaldavad umbes 30 kuni 300 kolooniat. Juba loendatud kolooniate märkimiseks kasutage alalist markerit, et vältida samade kolooniate kahekordset loendamist.
Jagage iga plaadi mullalahuse lahjendusega kolooniate arv - "10 ^ -4", "10 ^ -5" või "10 ^ -6". Iga loendatava plaadi tulemuste keskmistamiseks leidke kultiveeritavate bakterite arv algses grammis mullas.