Sisu
Escherichia coli, E. coli, on bakter, mis kasvab imetajate alumises sooles. See bakter avastati esmakordselt 1800. aastate lõpus. Sellest ajast alates on sellel olnud pikk kogemus teadusuuringutes. See on molekulaargeneetikas kõige laialdasemalt kasutatav organism. Üks põhjus, miks E. coli kasutatakse tavaliselt teaduslikes uuringutes, on asjaolu, et seda on lihtne laboris kasvatada. E. coli kasvamist hõlbustavad tegurid on lihtne toitumisvajadus, kiire kasvukiirus ja mõõdukad hooldusvajadused.
Steriliseerige inokuleeriv silmus, asetades selle Bunseni põleti leeki. Lükake silmuse alumine pool läbi leegi, kuni see helendab punaselt.
Laske silmusel jahtuda. Võite jahutada seda plaadil oleva steriilse agariga, veendumaks, et see on jahtunud. Ärge asetage silmust lauale ega lase sellel puutuda kokku muuga kui steriilse agariga või soovitud kultuuriga, kui see on steriliseeritud.
Kastke silmus E. coli kultuuri ja eemaldage see.
Avage agariplaat ja libistage silmus ettevaatlikult edasi-tagasi agari ühe sektsiooni pinnale. Hoolitsege selle eest, et te ei kriimustaks agarit läbi silmuse. Kuid agar pakub toitaineid, mida E. coli vajab kasvamiseks.
Pange silmus uuesti Bunseni põleti leeki, et seda steriliseerida. Kui silmusvarras on jahtunud, puudutage seda jaheda plaadi steriilsesse ossa ja libistage silmus läbi oma esimese vööt, et moodustada teine vööt. See teine riba on esimese osa lahjendatud versioon. Korrake steriliseerimist ja libisemist, kuni agariplaadi mitu osa on libistatud. Selle põhjuseks on see, et saate hiljem valida üksikute kloonikolooniate hulgast. See aitab veenduda, et teil on vähemalt üks sektsioon, kus on üksikud kolooniad - mitte liiga kontsentreeritud (millel on liiga palju kasvu ja mis ei võimalda teil valida ühest kolooniast) ja mitte liiga lahjendatud (mis ei anna kolooniaid) .
Steriliseerige silmus viimast korda leegis, enne kui asetate selle tööpiirkonda.
Pange ülaosa agarplaadile. Pöörake plaat tagurpidi ja asetage inkubaatorisse, mis on seatud temperatuurile 37 ° C (98,6 kraadi Fahrenheiti). See ideaalne inkubeerimistemperatuur simuleerib inimese keha temperatuuri, kus E. coli elab. 24–48 tunni jooksul ilmuvad agariplaadile nähtavad E. coli bakterite kolooniad.