Sisu
Bakterite nagu Escherichia coli kultiveerimiseks kasutatakse vedelat toitainepuljongit. Selle puljongi retseptid varieeruvad sõltuvalt bakteriliigist ja geneetiliste modifikatsioonide olemasolust, nt antibiootikumiresistentsus. Puljongi saab tahkestada agari lisamisega, mis võimaldab bakteritel moodustada eraldiseisvaid kolooniaid, vedelas kultuuris aga hajuvad nad lihtsalt kogu ruumalas. See on põhiline, kuid hädavajalik tehnika selliste arenenud meetodite jaoks nagu geenide kloonimine või mikrobioloogilised testid. Selles artiklis eeldatakse, et standardseid Escherichia coli laboratoorseid tüvesid tuleb kasvatada Luria puljongil (LB) agariplaatidel (või Petri tassidel).
Kaalutakse 10 grammi bakterikvaliteediga trüptooni, 5 grammi pärmiekstrakti, 5 grammi naatriumkloriidi, 15 grammi agarit või agaroosi ja 1 milliliitrit 1 N naatriumhüdroksiidi. Segage neid ruumala destilleeritud ja autoklaavitud steriilse veega, kuni saadakse 1 liiter söödet. Autoklaavida sööde 25 minuti jooksul lahtiselt suletud pudelitesse või kolbidesse. Enne kui lisate kõrge kuumuse korral hävitatavaid reagente, näiteks antibiootikume või muid toidulisandeid, laske jahtuda umbes 50 kraadini.
Laske autoklaavitud keskkonnal jahtuda temperatuurini 50 ° C ja mitte madalamale kui 45 ° C, kuna agar asetub anumasse enne selle valamist. Hankige steriilsed Petri tassid ja valage piisavalt, et katta kogu plaadi pindala ja vähemalt pool selle sügavusest. Vältige taldrikute ületäitumist ja eelistatult ärge laske agaril nõu ülaservaga kokku puutuda. Laske plaatidel tahkestada steriilses keskkonnas (nt laminaarse voolukatte all), jättes kaaned maha ja kapoti nurka.
Kuivatage plaadid. Ehkki plaate saab kasutada kohe, kui need on paika pandud, on agari pinnal pisut niiskust, mis hoiab ära bakterikolooniate piisava kleepumise. Seetõttu on kõige parem kuivatada plaadid enne bakterite lisamist, näiteks jättes need mõneks päevaks või pooleks tunniks toatemperatuurile laminaarse voolukatte alla või 37-kraadisesse inkubaatorisse istuma.
Hoidke plaate. Kuivatatud taldrikud tuleks kaantele virna panna (tagurpidi) ja panna tagasi originaalpakendisse, sulgeda teibiga ja valguse eest kaitsmiseks fooliumisse mähkida või sobivasse mahutisse. Kirjutage alati plaatidele valmistamise kuupäev ja vältige kasutamist, kui plaadid on vanemad kui 2 kuud.