Ensüüm on valk, mis katalüüsib (suurendab) keemilisi reaktsioone. Enamiku ensüümide optimaalne temperatuur või temperatuur, mille juures ensüümid kõige paremini reaktsioone hõlbustavad, on vahemikus 35–40 kraadi. Temperatuuri tõus selles aknas suurendab reaktsiooni kiirust, kuna see eritab molekule ja suurendab ensüümide / reagentide kokkupõrke ja reageerimise kiirust, et saada produkt. Kuid liiga kõrge temperatuuri tõstmine võib ensüümi denatureerida ja takistada selle toimimist.
Määrake ensüümi optimaalne temperatuur, kuumutades reaktsiooni lõpmatus koguses ja võttes reaktsioonist väikseid proove, et teha kindlaks, millal tekib toote maksimaalne kiirus.
Valige meetod. Tehke kindlaks, kuidas kavatsete oma toote kontsentratsiooni katse erinevates punktides mõõta. Näiteks saate mõõta paljude toodete kontsentratsiooni spektrofotomeetri abil ja arvutada kontsentratsiooni neeldumise järgi või mõõta fluorestsentsi ja arvutada kontsentratsiooni fluorestsentsi põhjal.
Seadistage oma katse. Pange oma reagendid ja ensüüm väikesesse kaanega anumasse, näiteks stsintillatsiooniviaal. Reaktsioon algab. Pange stsintillatsiooniviaal suuremasse toatemperatuuriga vee keeduklaasi. Keeduklaas asetatakse kuumutusplaadile. Keeduklaasi pannakse termomeeter. See võimaldab teil mõõta reaktsiooni temperatuuri erinevates punktides.
Reaktsioonist võetakse 100 mikroliitri proov toatemperatuuril, umbes 25 kraadi. Lülitage kuumutusplaat sisse. Erinevatel temperatuuridel vahemikus 30–40 kraadi (30,5, 31, 31,5 jne) võtke oma reaktsioonist 100 mikroliitrit proovi.
Määrake oma toote kontsentratsioon igal temperatuuril. Kui temperatuur tõuseb üle 40 kraadi Celsiuse järgi, näete substraadi tooteks muundamise kiiruse langust, kuna ensüüm denatureerub. Punkt, kus toodet toodetakse maksimaalsel kiirusel, on temperatuur, kus temperatuur on optimaalne.