Sisu
Kõrgsurvevedelikkromatograafia on segu laboratoorse analüüsi tehnika. See on tõhus kromatograafiatüüp, mis kasutab segu proovi kolonni viimiseks kõrge rõhu asemel lihtsalt gravitatsiooni. Proov süstitakse, seejärel aitab kõrge rõhu sisaldav pump proovi liikuda mööda pakitud kolonni, kus see eraldatakse üksikuteks komponentideks. Seda eraldamist analüüsitakse seejärel detektoriga, et saada tulemusi.
Süstimiskoht
HPLC-sse süstimiseks tuleb proov kõigepealt lahustada polaarses vedelas lahustis, eelistatavalt sellises, milles on teadaolevad HPLC spektrid, et selle andmeid saaks proovidest eristada. Proovi sisaldav vedel lahus asetatakse mõõteriista ja saadetakse kolonni. Süstekoha tegelik asukoht sõltub instrumentide kaubamärgist. Enamikul juhtudel on süstimisprotsess automatiseeritud, kuid mõnel juhul peab laboritöötaja süstima proovi väikese süstlanõela abil.
Pumba komponent
HPLC-seadme pumpkomponent on vajalik, kuna see tagab rõhu, mis proovi kolonnist läbi ajab. Pumba tugevus varieerub, kuid võimas seade võib pärast proovi süstimist tekitada rõhu kuni 6000 psi ehk naela ruuttolli kohta. See võimaldab proovil kolonni kiiremini ja tõhusamalt läbida kui siis, kui see peaks ainult raskusjõudu kasutades läbi tilkuma.
Veeru kirjeldus
Pumba kaudu kolonni läbinud proovi suurenenud kiirus võimaldab kasutada teist tüüpi kolonne kui need, mida kasutatakse lihtsas vedelikkromatograafias. Kolonni pakkematerjalil võib olla palju väiksem osakeste suurus, mis suurendab pinna pindala ja soodustab seetõttu proovi interaktsiooni kolonniga. Enamik HPLC kolonne töötab polaarsuse kaudu. Proov lahustatakse polaarses lahustis ja kolonn koosneb peamiselt mittepolaarsetest süsivesinikest. Proovimolekuli polaarsed osad läbivad kolonni väga kiiresti, kuna need on peamiselt interaktsioonis lahustiga, samal ajal kui proovide mittepolaarsed komponendid püsivad kolonnis, moodustades nõrgad interaktsioonid kolonni komponentidega. Seetõttu väljuvad proovikomponendid kolonnist järjestuse järgi kõige polaarsest kuni kõige mittepolaarsemani.
Detektori funktsioon
Detektorid varieeruvad ka sõltuvalt kasutatava HPLC seadme tüübist. Enamik funktsioneerib siiski samal viisil. Ultraviolettvalgusallikas paistab eraldatud proovikomponentidelt kolonnist välja tulles. Enamik orgaanilisi ühendeid neelab teatud koguse valgust, nii et kui nad mööduvad rakendatud valguskiirest, saab detektor kindlaks teha, kui palju valgust neelab. Detektor registreerib ka komponentide peetumisaja vastavalt kolonni väljumise järjekorrale. Seda väljundit saab seejärel analüüsida piigi pindala alusel, et määrata proovide komponentide täpne olemus.