Sisu
Teadlased kasutavad bakterikultuuride asustustiheduse arvutamiseks järjestikuseid lahjendusi (seeria 1:10 lahjendusi). Kui tilk kultuuri, mis sisaldab väikest arvu baktereid, plaaditakse ja inkubeeritakse, on teoreetiliselt iga rakk teistest rakkudest piisavalt kaugel, et moodustada oma koloonia. (Tegelikult võivad mõned kolooniad olla kahe lähedalasuva raku järeltulijad, kuid lahjendatud kultuurides on see haruldane ja seetõttu on kolooniate arv väga hea hinnang algselt plaadile viidud rakkude arvu kohta.) Kuna asustustihedus on teadmata, tuleb ühe plaadi moodustamiseks sobiva arvu kolooniate saamiseks kasutada mitmesuguseid lahjendusi.
Järjestikused lahjendused
Märgistage kuus katseklaasi (igaüks sisaldab 9 ml kasvusöödet) 1: 6-ga. Märgistage kuus agariplaati 1: 6-ga. Kasutage pipeti ja steriilsete 1 milliliitri (ml) pipetiotsikute abil 1 ml bakterikultuuri katseklaasi. 1
Segage hästi ja viige 1 ml tuubist 1 pipeti ja steriilsete 1 ml näpunäidete abil tuubi 2.
Korrake 2. sammu ülejäänud katseklaasidega, viies iga kord viimati kasutatud katseklaasist 1 ml järgmisesse torusse.
Kasutage pipeti ja steriilsete 0,1 ml näpunäidetega, et viia 0,1 ml katsutisest 1 agarplaadile. Leegige L-kujuline klaasvarras ja kasutage seda tilga ühtlaseks jaotamiseks plaadi ümber. Inkubeerige plaati 48 tundi kasutatavate bakterite temperatuuril. Erinevat tüüpi bakteritel on erinev optimaalne kasvutemperatuur. Kui te ei leia võrdlusmaterjali abil optimaalset kasvutemperatuuri, proovige plaate inkubeerida 25 ja 37 kraadi juures.
Korrake sammu 4, kandes iga kord vedelikku teisest katseklaasist vastavale plaadile.
Rahvastiku arvutused
Vaadake kuut plaati ja valige see, millel on 30 kuni 200 isoleeritud kolooniat.
Korrutage plaadil olevate kolooniate arv 10-ga, et arvutada kasutatud lahjendustorust rakkude arv kultuuri milliliitri kohta.
Rakkude arvu arvutamiseks algkultuuri ml kohta korrutage etapis 2 saadud arv 10-ga (plaadi number). Väärtus 10 ^ (plaadi number) on plaadi inokuleerimiseks kasutatud kultuuri lahjendustegur.