Sisu
- Proovide lahjendamine, plaatimine ja inkubeerimine
- Käsitsi loendamine
- Automatiseeritud loendamine
- Loendamise keerukamaks muutmine
Üks klassikalisi viise mikroobide kontsentratsiooni määramiseks proovis on proovi lahjendamine, mikroobide kasvatamine plaatidel ja kolooniate loendamine. Plaaditud mikroobid kasvavad kolooniaid moodustavast üksusest, mis koosneb ühest või enamast rakust, nähtavaks kolooniaks, mida saab näha ja loendada. Bakterid on kõige levinum mikroob, mida hinnatakse plaatide arvu põhjal. Kolooniaarvestust kasutatakse mikroobide tuvastamiseks ja loendamiseks pinnases, vees ja toidus. Kolooniate loendamise protokollides rõhutatakse täpset ja metoodilist lähenemist.
Proovide lahjendamine, plaatimine ja inkubeerimine
Kui määrite mikroobiproovi lihtsalt agarplaadile, näete nii palju kolooniaid moodustavaid ühikuid, et üksikud kolooniad sulanduvad kokku, muutes nende loendamise võimatuks. Selle probleemi lahendamiseks segage proov vedelasse keskkonda, võtke väike kogus seda segu ja lahjendage seda veelgi. Korrake seda protseduuri kuus kuni kümme korda. Lõplik lahjendus levitatakse agarplaadil ja inkubeeritakse neli kuni seitse päeva enne kolooniate loendamist.
Käsitsi loendamine
Kolooniate loendamise peamine trikk on koloonia punktide üks kord loendamine. Üks lähenemisviis on seada Petri tass ruudustikule ja loendada kolooniad igas võrelahtris, liikudes metoodilise mustrina läbi kõigi rakkude. Kasulikuks lähenemiseks võib olla ka loendatud kolooniate märkimine Petri tassi tagaküljele. Üldiselt peate arvestama vähemalt kolme plaadiga; kasutada usaldusväärsete järelduste tegemiseks ainult 30–300 kolooniat sisaldavaid plaate, soovitab Microbiology Network - ettevõte, mis pakub laboritele ja tootjatele nõustamisteenuseid. Plaadid kolooniatega, mille arv on liiga suur, või liiga vähede kolooniatega plaadid tuleb uuest lahjendusest uuesti plaatida.
Automatiseeritud loendamine
Inimlikud eksimused lisavad aega kolooniate käsitsi loendamiseks. Nii täpsuse kui ka efektiivsuse parandamiseks asetage Petri tass automatiseeritud kolooniate loendusseadmesse. Automatiseeritud kolooniate loendurid teevad tassi pildi, eraldavad kolooniad taustast ja kasutavad seejärel algoritmi, et kolooniaid taldrikul loendada. Algoritmidel võib olla raskusi kolooniate eristamisel, kui servi puudutavad kaks või enam kolooniat, nii et see on pideva tarkvaraarenduse valdkond.
Loendamise keerukamaks muutmine
Mikroobide tiheduse arvutamisel kolooniate arvu täpsusel on mõned piirangud. Kolooniaid moodustavateks ühikuteks võivad olla üksikrakk, rakuahel või terve rakukomplekt. Eeldatakse, et koloonia esindab ühte rakku, nii et kolooniate arvust arvutatud kontsentratsioonid võivad olla madalad. Erinevad mikroobid vajavad erinevaid kasvutingimusi ja plaadil olevad kolooniad tähistavad ainult neid mikroobid, mis sellel inkubatsioonitingimustel sellel kasvukeskkonnal õitsevad. Lisaks ei registreeri kolooniate loendamine surnud rakke, mis on oluline kaalutlus, kui vajate rakkude kontsentratsiooni algses proovis.